膝骨关节炎(knee osteoarthritis，KOA)常表现为关节疼痛和关节功能障碍。现代医学认为KOA的病理症状是因关节软骨损伤所致[1]。良性的应力刺激可维护骨代谢平衡，而这是通过软骨表面的力学信号感受器来诱发力学信号通路实现的[2]。整合素β1所介导的黏着斑激酶(focal adhesion kinase，FAK)信号通路是软骨表面特殊力学的主要传导通路之一[3]。FAK作为一种胞质非受体蛋白酪氨酸激酶，活化后能与多种下游分子结合，同时还能启动丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)信号转导通路。在不同的刺激因素下MAPK可被激活而形成不同的转导通路，其中细胞外调节蛋白激酶(extracellular regulated protein kinases,ERK)1/2、c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)和p38MAPK这3条信号通路与骨关节炎关系密切。本实验以KOA兔模型作为研究对象，观察刃针干预对KOA兔膝关节软骨组织整合素β1、p38、FAK、JNK等蛋白表达的影响，并分析针刀干预的力学转导通路。

1 材料与方法

1.1 主要仪器与试剂

1.1.1 仪器：X光机(上海先威光电科技有限公司，型号：X-BJI)；HANS 穴位神经刺激仪(南京济生医疗科技有限公司,型号：LH202H)；微型涡旋混合仪(苏州江东精密仪器有限公司，型号：WH-3)；蛋白质电泳及转膜系统(美国Bio-Rad公司)；凝胶成像系统(美国Alpha Innotech公司)；全波长多功能酶标仪(Tecan 奥地利公司，型号：Tecan Infinite 200 PRO)；汉章牌一次性无菌刃针(北京华夏针刀医疗器械厂，规格：0.40 mm×40 mm)；华佗牌一次性无菌电针(苏州医疗用品厂有限公司，规格：0.25 mm×25 mm)。

1.1.2 试剂：抑制剂PF-(美国塞立克公司，批号:S2890)；整合素β1抗兔单克隆抗体(上海雅吉生物科技有限公司，批号：S-0342R)；FAK抗兔单克隆抗体(武汉纯度生物科技有限公司，批号：)；p38鼠抗兔单克隆抗体(北京百奥莱博科技有限公司，批号：ABM)；JNK鼠抗兔单克隆抗体(美国Santa Cruz公司，批号：BYK-2592R)；ERK1/2抗兔单克隆抗体(美国Santa Cruz公司，批号：GMS)；二抗山羊抗小鼠IgG(北京天德悦生物科技有限责任公司，批号:S001)；蛋白提取试剂盒(碧云天生物有限公司，批号：C3702)；二喹啉甲酸法蛋白浓度测定试剂盒(碧云天生物有限公司，批号：AR0146)。

1.2 实验动物 选取6月龄新西兰白兔63只(购自济南金丰实验动物有限公司)，均由柳州市中医医院综合实验室喂养，许可证号：ZKL(桂)。白兔体重2.5～3.0 kg,雌雄不限，普通级，均为单笼规律喂养，自由摄食和饮水，自然光线照射，相对湿度40%～60%，室温(22±2)℃，定期紫外线消毒。

1.3 模型制备 在63只白兔中，采用随机数字法选取54只白兔的右下肢进行造模，采用前交叉韧带切断术建立兔KOA模型。造模前禁食，使用5%的水合氯醛(3 mL/kg)经耳缘静脉注射麻醉白兔，麻醉后仰卧固定于操作台上，常规备皮、消毒，沿膝关节内侧做长纵弧形切口，逐层剖解浅筋膜、肌肉，将髌韧带移向膝外侧，剖解关节囊，屈曲膝关节，找出前交叉韧带并剪断；彻底止血，将髌骨复位，采用3-0可吸收缝线闭合关节筋膜、关节腔，然后采用2-0丝线缝合皮肤。术后给予每只白兔肌肉注射青霉素20 U/次，预防感染，2次/d，连续注射3 d。术后每日笼外放养2 h，使术侧膝关节主动屈伸活动，常规标准饲养4周。造模前及造模后4周均行X线检查，了解白兔膝关节内外侧间隙、关节面、关节边缘以及软骨下骨情况，如X线检查提示骨质疏松，关节面不规则，关节间隙狭窄，软骨下骨质硬化以及边缘唇样改变，表示建模成功。

1.4 动物分组 造模的54只白兔中，2只出现感染，1只出现神经压迫损伤，3只出现骨折，最终共48只造模成功。采用随机数字表法将造模成功的48只白兔随机分为模型组、模型抑制组、刃针组、刃针抑制组、电针组、电针抑制组，每组8只。而9只未造模的白兔中，有1只出现足底溃烂，最终纳入8只白兔作为空白组。

1.5 干预方法

1.5.1 空白组：规律饲养，不予任何干预。

1.5.2 模型组：造模成功后规律饲养，不予任何治疗。

1.5.3 刃针组：造模成功后1 d，按照《灵枢》“经筋理论”阐述的经筋分型[4]，在患肢髌周、双膝眼、膝后处找到条索、筋结或厚实感状的阳性反应区，用龙胆紫定位进针部位，常规备皮、消毒。用刃针快速刺入皮肤切面，向结节的纵轴方向进行上下松解，以刺破深筋膜让其张力降低为宜。出针时按压片刻予以止血；刃针治疗后给予梁丘、阳陵泉、足三里推拿，以拔伸牵引法为主，按压松弛肌肉起止点，调整肢体力线。隔日治疗1次，1周3次，共治疗2周。